Me gustaría si pudieras explicarme como leer este estudio por que llego hasta la parte de donde se expesa en los tejidos pero no logro entender como calcular la tasa o frecuencia con los valores que me dan.
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Respuesta de mayamigos
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mayamigos, Licenciada en biología, realizando doctorado, especializada en...
La técnica de Northern Blot consiste en, se extrae RNA por ejemplo se coge como en tu caso todos los mRNAs que tiene una célula en un determinado momento para ver qué está expresando. Después se corre en un gel para separar por tamaños y así ya poder tener una idea de lo que es cada cosa, y después se transfiere a una membrana cargada con una sonda que hibride con lo que estemos buscando marcada (radiactivamente por ej), por ejemplo queremos ver si se expresa un determinado gen BRCA1, así que vamos a hibridar con una sonda (otro RNA complementario al que estamos buscando), y así después se quedarán marcados sólo los mRNAs que complementen, es decir el de interés. De esta forma se pueden hacer comparaciones entre tejidos. Luego para cuantificar si hay más expresión en uno que en otro, por lo general se toma una foto y con un programa de análisis de imagen (por ejemplo el Image J) según la intensidad del color y el tamaño de la banda se pueden hacer las cuantificaciones.
Gracias, lo que me quedo 1 duda, po ejemplo si tienes 2 sondas con 2 exones diferentes marcadas a 850 pb, en 1 de ellas no se expresa en 1 órgano, y en el otro si, pero difiere en el numero de pares de bases, osea se encuentra a 650 pb. Tendría que asumir que la patología esta en el exon que no expresa en ese órgano y la medida del exon siempre es la diferencia entre las marcas de la sonda (850 - 650)pb. Desde ya muchas gracias
Claro al no expresarse un exón el tamaño del mRNA es menor y lo vemos marcado con la sonda para el exón que se mantiene, en este caso en 650 pb, por tanto el exón que falta tendrá un tamaño de 200 pb que es la diferencia. Muy bien