¿Alguien sabe algún método de obtención de proteínas vegetales pero sin desnaturalizarlas?
Estoy intentando obtener una proteína vegetal pero sin que pierda sus propiedades y los métodos que he utilizado incluyen un ciclo de calor, lo cual desnaturaliza la proteína y pierde su función biológica, me gustaría saber de algún método que no incluya calor ni pH muy ácidos o básicos.
En investigación de biología molecular de plantas habitualmente se utilizan medios mecánicos para la lisis. En concreto lo que más he usado ha sido un aparato que simplemente giraba una punta que encaja con el fondo de tubos eppendorf. Obviamente esto es solo para volúmenes pequeños.
En general cualquier método mecánico te valdrá, tipo homogenizador de hojas, fast-prep... el que tengas disponible y se adapte a los volúmenes que requieres
Deberás tener cuidado con la temperatura llevando a cabo la homogenización en hielo, con materiales pre enfriados. También debes tener mucho cuidado con la oxidación de las proteínas puesto que las plantas son ricas en polifenoles que oxidan de maravilla. Para ello añadimos PVPP (polivinilpirrolidona, que queda en suspensión) y DTT entre 2-5 mM. El resto es igual que la obtención de cualquier extracto proteico (tampón pH normal, sales, EDTA, inhibidores de proteasas...)
