Diferencias de un microscopio invertido campo brillante y fase

El microscopio de contraste de fase es, en esencia, un microscopio de campo brillante con dos añadidos, el diafragma anular y la placa anular de fase.

- Diafragma anular: Este diafragma solo deja pasar la luz a través de una línea circular.

- Placa anular de fase: Esta placa ralentiza los rayos de luz procedentes del condensador.

Gracias 

Qué usos principales tienen cada uno ?

La microscopía de contraste de fases permite distinguir bien materiales transparentes e incoloros —que provocan por diferencias de difracción desplazamientos de fase de la onda luminosa— que de otra manera, con la microscopio convencional, serían total o casi totalmente indistinguibles.

Se usa principalmente para examinar material vivo, por ejemplo las células en un cultivo de tejido. En microscopía lumínica (no electrónica) convencional lo que se hace con la muestra antes de observarla es fijarla (abreviadamente, coagular el material, lo que lo mata) y teñir con colorantes (que a menudo envenenan las células si no están ya muertas), aprovechando que distintos colorantes se fijan en distinto grado en los componentes de las células. Cuando ves una película en la que se ve la mitosis desarrollándose, estará hecha con contraste de fases.

La foto de arriba es una de mucosa bucal como las que se suelen ver en las prácticas de biología del instituto, pero sin fijar ni teñir, observada con contraste de fase.

Un microscopio de contraste de fases requiere usar un condensador especial (foto siguiente) y que se pueda centrar bien, así como objetivos especiales, y también un ocular específico (un ocular telescópico de Bertrand) para las operaciones de ajuste que en otras modalidades de microscopía no es imprescindible. En la foto siguiente un condensador desde arriba y desde abajo; los anillos claros rodeados de negro son para proporcionar fondo oscuro a distintos objetivos.

Siguiendo con otro tema, en la microscopía lumínica (u óptica, o foltónica, es decir la que se basa en la luz y no en haces de electrones, que es la que llamamos microscopía electrónica) hay dos posibilidades respecto al color del fondo. En primer lugar, la de campo claro (o brillante), en la que la muestra se ve oscura contra u fondo blanco; en segundo lugar, la de campo oscuro, donde la muestra se ve iluminada y contrastando con un fondo negro. Lo típico es lo primero, lo segundo se logra con ajustes y complementos del condensador para que la muestra quede iluminada lateralmente.

Tercer tema, un microscopio invertido es uno en el que la imagen se ve desde abajo en vez de desde arriba. En la normal la fuente de luz y el condensador están debajo de la platina donde se pone la muestra, y el objetivo la ve desde encima. En la invertida la luz y el condensador están encima de la muestra y el objetivo está debajo de la platina donde se coloca la muestra y mirando hacia arriba. Se usa, como en la foto de abajo, para examinar materiales vivos, así que puede combinarse con el contraste de fases o con el campo. En la foto se ve el revólver portaobjetivos debajo de la platina sobre la que se ve un frasco de cultivo con tapón verde; encima se ve un condensador de contraste de fases, con tornillos para regular la posición, y giratorio para elegir el disco apropiado a cada objetivo (fondo oscuro) o para fondo claro.

Los microscopios de contraste de fase y los invertidos son equipos profesionales para el laboratorio, caros y casi siempre voluminosos. El fondo oscuro, sin embargo, se puede alternar con el claro en un microscopio corriente que tenga un condensador estándar, de Abbé, al que se le pone en la bandeja portafiltros (foto de abajo) un disco que sólo deja pasar la luz por los bordes del círculo (el anillo claro, como en la foto de condensador de arriba); es decir, está al alcance de cualquiera con un microscopio estándar (no de juguete) como los que se pueden comprar a partir de unos 250 ó 300 euros.

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Al dar a enviar se han perdido las fotos. Es que este sitio es un poco crudo, pero espero que puedas reconstruirlo todo.

Gracias.

Porqué los microscopios invertidos traen objetivos de campo claro y también de fase, si realmente para vivas sin teñir no se puede usar los primeros , sería para usarlos como si el microscopio fuera convencional de campo claro ?

Tengo que advertirte que mis conocimientos no son profundos y, aunque uso campo oscuro a veces, casi no he probado el c. de f., ni he tocado en mi vida un microscopio invertido. Dicho esto, el contraste de fases no es la única opción para examinar materiales vivos (está por ejemplo la microscopía de contraste interferencial), ni esa la única aplicación de un microscopio dotado para el contraste de fases. El c. de f. produce artefactos derivados de que no puede usar la abertura completa del condensador y de los objetivos, y la resolución es proporcional a la abertura. Es conveniente conservar la opción de usar alternativas en el examen de los mismos campos en las mismas muestras, por ejemplo si se usa una coloración vital (no tóxica) que en contraste de fases no se aprovecha. De la misma manera los microscopios invertidos no valen sólo para mirar cultivos, sino para funciones como examinar superficies en objetos metálicos gruesos.

He encontrado una página muy completa, también bastante técnica, y en inglés, por si te interesa:

https://www.microscopyu.com/techniques/phase-contrast/phase-contrast-microscope-configuration 

Gracias.

Sabes de alguna página web que explique el uso del microscopio invertido para cultivo de tejidos, donde pueda enterarme a fondo del tema.

Que gracioso mientras te contestaba me llegó lo que pedía.

Gracias. Saludos.